كيفية جعل هذا التلطيخ immunohistochemical
الفوسفات المالح (PBS) هو محلول عازلة يستخدم بشكل شائع للتلوين المناعي (IHC) ويستخدم غالباً في البحوث البيولوجية. PBS هو محلول ملح مائي يحتوي على فوسفات هيدروجين الصوديوم وكلوريد الصوديوم وفي بعض الحالات كلوريد البوتاسيوم وفوسفات هيدروجين البوتاسيوم.
تلطيخ المناعي
تشير الكيمياء المناعية إلى عملية اكتشاف المستضدات مثل البروتينات في خلايا قسم الأنسجة باستخدام مبدأ الأجسام المضادة الملزمة تحديدًا للمستضدات في الأنسجة البيولوجية.
كان تلطيخ مناعي أول طريقة تلطيخ المناعية.
تصبح المستضدات مرئية عند اقترانها بأجسام مضادة باستخدام صبغات مضانّة بسبب تفاعل ربط مستضد-جسم مضاد. تحدث هذه العملية عندما يتم تنشيطها بواسطة ضوء مثير لطول موجة محدد تحت المجهر الفلوري.
تتطابق تركيزات الأسمولية والأيونات للحلول مع تلك الخاصة بجسم الإنسان - فهي متساوية التوتر.
وصفة ل PBS
يمكنك إعداد PBS بعدة طرق. هناك صيغ متعددة. بعض منها لا تحتوي على البوتاسيوم ، في حين أن البعض الآخر يحتوي على الكالسيوم أو المغنيسيوم .
هذه الوصفة سهلة نسبيا. انها لحلول الأسهم PBS 10X (0.1M). ومع ذلك ، يمكنك أيضًا إنشاء حل أسهم 1X ، أو البدء بهذه الوصفة 10X وتخفيفها إلى 1X.
تستغرق العملية بأكملها حوالي 10 دقائق.
كما يتوفر خيار لإضافة Tween.
ما سوف تحتاج إلى جعل PBS Buffer
- فوسفات الصوديوم monobasic (لا مائي)
- فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدة (لا مائي)
- كلوريد الصوديوم
- مقياس وزنها القوارب
- محراك مغناطيسي وقضيب التحريك
- مسبار الأس الهيدروجيني هو محسوب وحلول مناسبة لضبط الرقم الهيدروجيني
- قارورة 1L الحجمية
- توين 20 (اختياري)
كيفية جعل المياه المالحة الفوسفاتية (PBS)
يزن 10.9 غ فوسفات الصوديوم اللامائية (Na2HPO4) ، 3.2g فوسفات الصوديوم اللامائية مونوباسيك (NaH2PO4) ، و 90 كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم).
تذوب في أقل من 1L الماء المقطر.
ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 وجعل الحل يصل إلى الحجم النهائي من 1L.
تمييع 10X قبل استخدام وإعادة ضبط الرقم الهيدروجيني إذا لزم الأمر.
يمكنك عمل حل PBS يحتوي على 0.5 في المئة Tween 20 بإضافة 5mL توين 20 إلى حل 1L.
نصائح لجعل PBS Buffer
قم بتخزين المخزن المؤقت في درجة حرارة الغرفة بعد إجراء حل PBS.
يمكن استبدال الكواشف غير اللامائية ولكن سيكون عليك إعادة حساب الكتلة المناسبة لكل منها لتتوافق مع جزيئات الماء المضافة.
استخدامات الفوسفات المالح المخزن (PBS)
فالفوسفات المملوء بالمخزونات له العديد من الاستخدامات لأنه متساوي التوتر وغير سام لمعظم الخلايا. ويمكن استخدامه لتخفيف المواد وغالبا ما يستخدم لشطف الحاويات من الخلايا. يمكن استخدام PBS كمخفف في العديد من الطرق لتجفيف الجزيئات الحيوية ، لأن جزيئات الماء داخلها سوف يتم تنظيمها حول المادة - البروتين ، على سبيل المثال. سيكون "المجففة" وشل الحركة إلى سطح صلب.
يبقى الرقم الهيدروجيني ثابتًا وثابتًا لمنع تدمير الخلايا.
إن الغشاء الرقيق من الماء الذي يرتبط بهذه المادة يمنع عملية التشبع أو التغيرات التركيبية الأخرى. يمكن استخدام مخازن الكربونات للغرض نفسه ولكن بفعالية أقل.
كما يمكن استخدام PBS لأخذ طيف مرجعي عند قياس امتزاز البروتين في مقياس الاهتزاز.