يستخدم هذا المخزن لفصل الكهربي من الحمض النووي
إن المخزن المؤقت TBE مفيد بشكل خاص لفصل شظايا الحمض النووي الأصغر (MW <1000) ، مثل المنتجات الصغيرة من هضم الإنزيمات التقييدية .
TBE لديه قدرة التخزين المؤقت أكبر وسيمنح دقة أكثر دقة من TAE buffer . المخزن المؤقت TAE هو محلول يتكون من قاعدة تريس وحمض الخليك و EDTA (Tris-acetate-EDTA).
TBE عادة ما يكون أكثر تكلفة من TAE ويثبط الحمض النووي الريبيز ، والذي قد يسبب مشاكل إذا كان المقصود لاحقا تنقية الحمض النووي وخطوات الربط. مع الخطوات الثلاث البسيطة التالية ، تعرف على كيفية عمل مخزن مؤقت TBE. يجب ألا يستغرق الأمر أكثر من 30 دقيقة لإنشاء هذا المخزن المؤقت. إليك الطريقة:
إعداد حل الأسهم من EDTA
يجب تحضير محلول EDTA (حمض إيثيلين دايامين تيراسيتيك) في وقت مبكر. لن تذهب EDTA بالكامل إلى الحل حتى يتم ضبط الأس الهيدروجيني إلى حوالي 8.0. للحصول على محلول 500 ميلليتر من 0.5 EDTA ، تزن 93.05 جرام من ملح ثنائي الصوديوم EDTA (FW = 372.2). ثم تذوب في 400 ملليلتر من الماء منزوع الأيونات وتعديل درجة الحموضة مع هيدروكسيد الصوديوم. بعد ذلك ، قم بتعبئة الحل النهائي بحجم 500 ملليلتر.
إعداد حل الأسهم من TBE
اصنع حلاً مركباً (5X) من TBE بوزن 54 غ Tris base (FW = 121.14) و 27.5 g boric acid (FW = 61.83) وحل كل من 900 ملليلتر من الماء منزوع الأيونات. ثم أضف 20 ملليلتر من 0.5 EDTA (pH 8.0) واضبط المحلول على الحجم النهائي من 1 لتر.
يمكن تخزين هذا المحلول في درجة حرارة الغرفة ، ولكن سيشكل راسب في حلول قديمة. تخزين المخزن المؤقت في زجاجات زجاجية وتجاهل إذا تشكل راسب.
إعداد حل العمل من TBE
بالنسبة للهلام الكهربائي للهلام ، يمكن استخدام مخزن عازلة TBE بتركيز 0.5 x (التخفيف 1:10 للمخزون المركز). تمييع الحل الأسهم بنسبة 10x في الماء منزوع الأيونات. تركيزات المذاب النهائية هي 45 ملم تريس بورات و 1 ملي EDTA. المخزن المؤقت جاهز الآن للاستخدام في تشغيل هلام agarose .
ماذا تحتاج
لجعل المخزن المؤقت TBE ، ستحتاج إلى أربعة مواد فقط. العناصر المتبقية في هذه القائمة هي المعدات. المواد الأربعة المطلوبة هي EDTA ملح الصوديوم ، وقاعدة تريس ، وحمض البوريك والماء منزوع الأيونات.
بالنسبة إلى المعدات ، ستحتاج إلى مقياس درجة الحموضة ومعايير المعايرة ، حسب الاقتضاء. بالإضافة إلى ذلك ، ستحتاج إلى الأكواب أو القوارير بحجم 600 مليمترا و 1500 مل. تقريب احتياجات المعدات الخاصة بك هي اسطوانات مدرجة وتحريك القضبان وألواح التحريك.
تحقق من المخزون في المعمل الذي ستستخدمه للتأكد من أن لديك كل ما تحتاجه قبل البدء. لا شيء أسوأ من الاضطرار إلى التوقف في منتصف إعداد حل لأنك نفدت المواد المناسبة.
إذا كان المختبر الخاص بك في المدرسة أو موقع عملك ، تحقق مع الموظفين المناسبين لمعرفة أن لديهم جميع العناصر الموجودة في المخزون. قد يؤدي القيام بذلك إلى توفير الوقت والطاقة في النهاية.