التجفيف بالتبريد ، أو التجفيف بالتجميد ، هو إجراء مخبري قصير
أساسيات lyophilization
واحدة من أفضل الطرق لتخزين البكتيرية ، الفطرية ، الخميرة أو غيرها من ثقافة الكائنات الحية الدقيقة لفترات طويلة من الزمن هو استخدام عملية التجفيف بالتجميد. يمكن إجراء هذا الإجراء المخبري القصير مع أي مجفف تجميد متاح تجاريا يحافظ على مجموعة ثقافتك. لأن التجفيد هو الشكل الأكثر تعقيدا وكلفة من التجفيف ، فإن العملية تقتصر عادة على المواد الحساسة الحساسة للحرارة ذات القيمة العالية. يمكن عادةً تجفيف المواد التي لا تتلف بسبب التجميد حتى لا يكون التخزين المبرد غير ضروري.
يمكن أن تستغرق هذه العملية ما لا يقل عن ثلاث ساعات ، وطوال 24 ساعة ، بما في ذلك وقت نمو الثقافة.
عملية خطوة بخطوة من Lyophilization
أولا ، تنمو ثقافة بين عشية وضحاها ، أو العشب ، من الكائنات الحية الدقيقة على LB أو غيرها من لوحة أجار المغذيات المناسبة.
بعد ذلك ، قم بإعداد قارورة معقمة باستخدام الأوتوكلاف في وقت مبكر ، مع وضع القبعات (سدادات مطاطية) بشكل علوي في الأعلى. ضع ملصقات الورق المطبوعة مع تعريف الثقافة داخل الأنابيب قبل التعقيم. بدلا من ذلك ، استخدم أنابيب مع أغطية مصممة للعقم .
إضافة 4 مل العازلة lyophilization إلى لوحة. إذا لزم الأمر ، يمكن تعليق الخلايا باستخدام قضيب زجاجي معقّم.
نقل بسرعة تعليق ثقافة لقارورة معقمة. أضف ما يقرب من 1.5 مل لكل قنينة. ختم مع غطاء المطاط.
تجميد تعليق الثقافة داخل قوارير عن طريق وضع قوارير في الثلاجة -20 درجة سيليسيوس.
وبمجرد تجميد الثقافات ، قم بإعداد مجفّف التجميد من خلال تشغيله وإتاحة الوقت لاستقرار ظروف الحرارة والفراغ المناسبة. افعل ذلك وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة للعلامة التجارية الخاصة بمجفف التجفيف الذي تستخدمه.
بعناية ، وبطريقة معقمة ، وضع قبعات قارورة فضفاضة على الجزء العلوي من قارورة ، بحيث يمكن للهروب الهروب أثناء عملية التجميد التجفيف ، ووضع القارورة في غرفة التجميد مجفف. تطبيق الفراغ على الغرفة وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
السماح للثقافة الوقت لتجفيف ly بالكامل (تجف). قد يستغرق ذلك من بضع ساعات إلى ليلة واحدة اعتمادًا على حجم كل عينة وعدد العينات التي لديك.
إزالة العينات من غرفة التجميد - التجفيف وفقا لتعليمات الشركة الصانعة وعلى الفور ختم قوارير مع أغطية المطاط ، ثم قمم تجعيد.
تخزين مجموعة ثقافة مجفف بالتجميد في درجة حرارة الغرفة.
المنتجات التي ستحتاج إليها
- مجفف تجميد
- المغذيات أو غيرها من لوحات أجار مناسبة (وحاضنة لزراعة الثقافة)
- الزجاج قضيب
- عازلة Lyophilization
- قوارير تجعيد أعلى مع سدادات مطاطية (و المكشكش لتطبيق القبعات)
- الفريزر
مرجع:
SP العلمية. المبادئ الأساسية لتجفيف التجميد. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/